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ELISA試劑盒對(duì)試劑預(yù)備一般不太注意，一般的做法是，在試驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來(lái)即用，而疏忽了這種做法有也許影響后邊溫育時(shí)刻不行的疑問(wèn)，其直接的結(jié)果是對(duì)一些弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢查呈現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測(cè)定中試劑的預(yù)備zui為要害的是，在試驗(yàn)開(kāi)端前，將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測(cè)定，以使試劑盒在運(yùn)用前與室溫平衡。這么做的意圖，主要是為了在后邊的溫育反響步驟中，能使反響微孔內(nèi)的溫度能較快地到達(dá)所請(qǐng)求的高度，以滿(mǎn)意測(cè)定請(qǐng)求。其次，如今的產(chǎn)品ELISA試劑盒中的洗板液均需在試驗(yàn)室運(yùn)用時(shí)對(duì)所提供的濃縮液稀釋制造，因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)確保質(zhì)量。此外，當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí)，則底物溶液應(yīng)在反響顯色前暫時(shí)制造。

在如今的ELISA試劑盒產(chǎn)品試劑盒中，血清樣本的參加幾乎是*的要運(yùn)用微量加樣器參加樣本的步驟。運(yùn)用微量加樣器加樣有必要注意的要害點(diǎn)是：加樣不行太快，要避免加在孔壁上部，不行濺起和發(fā)生氣泡。加樣太快，無(wú)法確保微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易致使非特異吸附。濺起會(huì)對(duì)附近孔發(fā)生污染。呈現(xiàn)氣泡則反響液界面有區(qū)別。試劑的參加在國(guó)產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很主要，滴加太快，很簡(jiǎn)單呈現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這么就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)呈現(xiàn)非特異吸附，然后導(dǎo)致非特異顯色。所以，有時(shí)候一份標(biāo)本用一樣的試劑盒這次測(cè)定為陽(yáng)性，下次測(cè)定為陰性，通常即是上述加樣及試劑的過(guò)錯(cuò)所造成的。

溫育是ELISA試劑盒測(cè)定中影響測(cè)定勝敗zui為要害的一個(gè)要素。ELISA作為一種固相免疫測(cè)定，抗原抗體的反響在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*，有必要在必定的溫度條件下反響必定的時(shí)刻。溫育所需時(shí)刻與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)刻相對(duì)較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。